Extraindo DNA em casa!

Mendel ficaria feliz se alguem tivesse mostrado isso para ele! DNA de ervilha Materiais necessários Ervilhas secas (aproximadamente 100 ml) Sal Água Amaciante de carne, suco de abacaxi ou solução limpadora de lentes de contato (fornecerão as enzimas). Um liquidificador Uma peneira Recipientes apropriados (copos, béckeres, etc.) Álcool 96º G.L. gelado Um cronômetro (relógio). Objetivos Extrair o DNA (ácido desoxirribonucleico) de células de ervilha, através de um método simples e acessível, demonstrando assim a materialidade desta substância. Procedimento Coloque a quantidade de ervilhas que vai usar de molho em 100 ml de água por, no mínimo, 30 minutos. Coloque as ervilhas, junto com sua água, no liquidificador. Coloque uma pitada grande de sal e mais 100 ml de água. Bata bem, por 15 segundos, na potência máxima. Passe sua sopa de ervilhas pela peneira, recolhendo o filtrado. Adicione em torno de 1/6 de detergente (em relação ao volume da "sopa"). Isto deve dar em torno de 2 colheres de sopa. Misture e deixe descansar por 5 a 10 minutos. Após este período, coloque a sopa em recipientes, preenchendo-os até 1/3 de sua capacidade (divida em 3 ou 4 recipientes menores). Coloque uma pitada de amaciante de carne e misture devagar. Cuidado ao misturar pois o ADN pode ser quebrado facilmente. O amaciante pode ser substituído por suco de abacaxi (filtrado) ou solução limpadora de lentes de contato. Use o suficiente. Deixe descansar por 5 minutos. Pegue os tubos (ou copos, etc.) e incline-os, derramando álcool gelado pela parede do recipiente. Coloque aproximadamente o mesmo volume de álcool que asopa de ervilhas. O ADN deve subir para a camada alcoólica e pode ser "pescado" por um palito de madeira ou outro tipo de gancho. Extraído de http://gslc.genetics.utah.edu/units/activities/extraction/ e desenvolvido pelo programa Natural History of Genes, custeado pelo Howard Hughes Medical Institute, da universidade de Utah.(tradução: Miguel de Oliveira). Para detalhes sobre a função de cada ingrediente e para o conhecimento básico de biologia envolvido, visite a página do Genetic Science Learning Center.

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Extração de DNA de mucosa bucal

1. Bochechar aproximadamente 10-15ml de água com açúcar (3%, uma colher de chá de açúcar em meio copo de requeijão. Uma quantidade maior de células pode ser obtida fazendo um raspado da mucosa com uma espátula de madeira).

2. Acondicione em um tubo cônico com tampa o volume obtido do bochecho (apenas 5ml) e adicione uma pitada de sal de cozinha (para aprox. 1% final).

3. Adicionar algumas gotas (5-10) de detergente diluído à 25% (1:4) e homogeneizar vagarosamente.

4. Aquecer a 55^oC por 10 min. Resfriar 5 min no gelo.

5. Adicionar álcool gelado (absoluto se possível) pelas bordas do copo lentamente, com o auxílio de uma colher de sopa, até que se alcance pelo menos 1cm de espessura.

O DNA (massaroca esbranquiçada) deverá formar um aglomerado e subir.

Extração de DNA de cebola na cozinha

1. Pegue ½ cebola em cubos (como no espaguetti). Pode se utilizar um liquidificador ou mixer quando disponível.

2. Adicionar 50ml de solução de lise (1 colher de sopa de detergente +1 colher de café de sal de cozinha). Elevar o volume com água da pia.

3. Aquecer a 55^oC por 10 min. Resfriar 5 min no gelo.

4. Passar a solução em um filtro de café. Opcional: Ao filtrado, adicionar uma pitada de amaciante de carne.

5. Adicionar álcool gelado (absoluto se possível) pelas bordas do copo lentamente, com o auxílio de uma colher de sopa, até que se alcance pelo menos 1cm de espessura

Será que funciona com outra amostra: ervilha, morango, Yakult, fermento biológico... Por que você não tenta em casa?

Quais são as dicas do "Chef"?

Compare os dois métodos. Quais são as semelhanças e diferenças? Como esse processo funciona?

Como age o detergente?O detergente dissolve lipídeos e proteínas rompendo a célula.

E a temperatura, o sal e o álcool?A temperatura elevada (55oC) inativa as DNAses (enzimas que degradam o DNA) e auxilia a dissolução da membrana celular.

O sal (NaCl) possibilita a precipitação dos ácidos nucleicos em solução alcoólica, porque ele bloqueia a eletronegatividade do esqueleto fosfato-açúcar e favorece a aglomeração das moléculas de DNA.

Como DNA não é solúvel em álcool, quando este é adicionado à mistura, todos os componentes da mistura, exceto o DNA, permanecem em solução, enquanto o DNA precipita na camada alcóolica.

Atenção aos cientistas cozinheirosOs materiais utilizados podem ser perigosos se ingeridos e devem ser manuseados com extrema cautela. O álcool é inflamável e deve ser mantido longe do fogo.

FONTE: Desenvolvida para o evento Genes no Parque, em comemoração aos 50 anos da descoberta da estrutura do DNA, a atividade DNA na Cozinha foi coordenada por Milton O. Moraes e contou com a participação inestimável de Alejandra N. Martinez, Cláudia F. Alves, Diogo Coutinho, Guilherme Mattos, Patrícia R. Vanderborght, Rocio Saavedro-Acero, Sidra E. Vasconcellos e Viviane M. Câmara. Todos os integrantes desenvolvem atividades de pesquisa no Laboratório de Hanseníase do Instituto Oswaldo Cruz/Fiocruz. Os procedimentos foram desenvolvidos a partir de métodos do laboratório ou descritos por outros autores, segundo o livro Biologia Molecular na Prática Médica e Biológica, de Milton º Moraes

Fonte Geral: Ministério da Saúde 

site: http://www.invivo.fiocruz.br/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?infoid=53&sid=3